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技术丨超敏免疫诊断(Immuno-PCR)

体外诊断主要有生化、免疫和分子等技术分类,其中免疫和分子各自有自己的标志物。之前的推送介绍了如何用免疫检测原理进行核酸分子的检测,其中以杂交捕获2作为典型例子进行说明。这种方法主要依靠抗体对DNA/RNA杂合体的特异性识别,尽管灵敏度不够,但使用简便,也适应HPV的检测需求,目前已经成为HPV检测的经典方法之一。












免疫PCR的特点

ELISA是一种免疫测定,目前有三种不同类型的ELISA。直接ELISA,夹心ELISA和竞争ELISA。其中夹心法用于检测大分子,竞争法用于检测小分子。ELISA易于操作,运行相对便宜,并且可用于高通量筛选。

PCR是用于扩增特定DNA片段的技术。传统PCR扩增的产物DNA在凝胶上运行并用溴化乙锭染色。实时定量PCR(qPCR),将PCR产物的产生与荧光强度相关联,通过监控其荧光信号进行核酸检测与定量。qPCR非常灵敏,且比免疫检测具有更宽的动态范围。

免疫PCR本质上综合了两种方法的优点,只要有适当的抗体试剂,ELISA就可以检测到任何蛋白质,但它可能不够灵敏,无法鉴定低丰度的蛋白质。虽然PCR提供指数信号放大,但它不能直接用于抗原检测。免疫PCR通过抗体-寡核苷酸缀合物,利用PCR的方法放大信号,使免疫检测拥有了超高的灵敏度。

免疫PCR最主要的特点如下:

低样品消耗:由于灵敏度高,检测通常只需要少量样品






另一个平台是RayBiotech开发的Immuno-Quantitative ELISA (IQELISA™),但该系列产品主要面向科研市场,在临床上应用较少。