生化试剂盒通过化学反应/酶促反应或物质结构特点测定样本中物质含量或酶活；所用仪器一般为分光光度计和酶标仪，两者的测定原理都是朗伯比耳定律: A=kbc，即当适当波长的一束平行单色光照射固定浓度均匀溶液时，其吸光度与光通过的液层厚度成正比。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可以进行测定。
1、样本处理方法有哪些？
试剂盒检测样本包括动物或植物组织、细菌/细胞和血清/血浆等。不同样本处理方法略有区别，具体参考说明书。
组织样本处理常用方法：
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g-10000g，4°℃离心10min，取上清置冰上待测。
细菌/细胞样本处理常用方法：
按照细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min)；然后10000g，4℃离心10min取上清置于冰上待测。
血清(浆)等液体样本处理常用方法：
直接测定，若有沉淀请离心后取上清待测。
2、测定前是如何调零?
使用分光光度计的用户，用蒸馏水或去离子水直接调零。使用酶标仪的用户，可以在一个孔里加入200μL的蒸馏水或去离子水，作为调零孔。
3、正式测定前为什么必须做预测定？
由于生物样品千变万化，就某种具体的样品而言，某个指标是否存在，其含量或者活性高低又随着样品种类、处理和阶段而发生显著变化，是否存在抑制物质或者类似物质等干扰，所以测定过程中通常都需要进行一定调整，尤其是提取与分离条件，找到适合于该样品的特定的测定方法，以保证测定数据可靠。
另外，测定所用试剂、仪器设备、耗材和水等也会影响到测定结果的可靠性，测定人员的操作是否规范到位，同样会影响到测定结果的可靠性。
预测定可以全面反映样品特点、试剂质量、仪器设备稳定性和操作规范性，根据预测定结果进行适当调整，确保正式测定结果真实可靠。
因此，为了确保测定结果的可靠性，无论是代测，还是购买试剂盒自己测定，都必须做好预测定，避免造成测定失败，浪费样品、试剂和时间！
4、如何做预测定？
实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验，严格按照说明书进行操作，注意仪器工作状态，操作规范，控制好测定条件，尤其是温度，分析预测定结果。确认无误后，才能开始正式测定。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。注意，临用前配制的试剂，一定要在上机测定前半小时左右配制！
5、样本如何稀释？
样本测定值若超出检测范围，可以将提取的上清液用提取液稀释后重新测定。一般从高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的顺序，选择一个合适的稀释倍数。
6、样本如何浓缩？
样本测定值若低于检测范围，可以提高样本浓度，如说明书中原来是称取.1g样本处理，实际称取0.2g样本加入1mL提取液匀浆，相当于将样本浓缩2倍。
7、如何节省样品数量？
通过分批测定，可以合理节省样品数量。在实际测定之前，通常无法预知某个指标变化的拐点。因此，为了确保全面反映该指标的变化情况，通常会尽可能取多个时间点或者发育阶段的样品。比如：先以大间隔方式测定，比如在处理后0 ~ 96小时，取样间隔是4小时，共计取样25个样品。第一批测定选择0、16、32、48、64、80和96小时的样品，共计7个样品，这样测定量就减少了72%。再根据测定结果，寻找拐点。如果没有明显变化，剩余的样品就可以不再测定；如果发现明显变化，例如在64小时附近变化显著，或者趋势发生变化，就可以再加测56、60、68和72小时4个样品，这样可以精确找到拐点。这样只需测定11个样品，就可以找到精确的拐点，工作量减少了56%。
8、加完试剂后是如何振荡混匀？
使用分光光度计的用户，可以将反应液加在离心管里，通过手动混匀或用涡旋振荡器混匀后马上转移到比色皿中检测。使用酶标仪的用户，可以将酶标仪在测定开始前设置一个5秒钟的振荡程序。
9、测定温度如何保证？
（1）根据说明书中指定测定温度，提前打开保温设备（如水浴锅），设到指定温度，在达到指定温度后，把冷藏的试剂转移到保温设备中保温30分钟以上，以保证反应一开始，就在指定温度中进行。
（2）对于拥有酶标仪的用户，直接提前预热，在达到设定温度后，可以直接把预热后的试剂，加入酶标板，然后开始反应。
（3）在保温设备（水浴锅和金属浴，最好是后者）进行。注意提前对保温设备进行预热，达到设定温度后再进行反应。但是仅适用于能够终止的反应。
（4）对于瞬间完成的反应，或者对温度不敏感的反应，为了提高重复性，最好在同一温度下完成检测。例如打开空调，设定在室温，如25℃。当然，所有控温设备，都要进行预热。
10、试剂盒检测时为什么不显色？
若严格按照试剂盒说明书进行操作时不显色，原因如下：
（1）前处理不当，例如测定酶活性，酶已经失活，包括样品保存条件不当、使用了导致酶失活的化学试剂和提取方法不当等；
（2）试剂盒保存不当，导致试剂盒中某些试剂失活；
（3）该样品确实不含有该成分，例如哺乳动物肝脏中葡萄糖激酶替代了己糖激酶，选择己糖激酶测定试剂盒当然无法测定到活性。
11、测定管与对照管为什么会没有差异，甚至低于对照管？
（1）如果空白值有点偏高，空白管存在一定的污染情况；
（2）测定与对照结果几乎没有差异；首先样本具体是什么，是否样本自身的含量偏低；再者就是提取步骤，是否按照说明书操作步骤进行，提取的充分程度，如果提取不充分也会导致结果偏低情况。可以考虑将样本取样量加大。
12、为什么△A会出现负值？
若严格按照试剂盒说明书进行操作时△A出现负值，原因如下：
（1）可逆反应造成。可以通过适当缩短反应时间来防止逆反应的发生。
（2）体系中发生了别的反应。该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收，并且变化方向相反，超过了希望发生的反应，同样可以通过设置新的对照排除。
（3）反应体系中存在颗粒或者气泡。随着时间延长，颗粒沉淀或者气泡破裂，会导致吸光度显著下降，出现负值。主要注意观察，即可发现是否属于这种情况。颗粒通常来源于样品粗提液，可以提供再次离心，确保得到澄清的上清液；当然也可能来自试剂，测定前观察试剂中是否有沉淀，如果有，一方面待充分溶解后再用，另一方面待颗粒沉淀下来后小心吸取上清液。气泡通常来源于反应本身，可以通过降低反应速度（如减少样品质量提取液体积比）来防止气泡产生。
13、为什么△A会接近于零？
若严格按照试剂盒说明书进行操作时△A会接近于零，表明反应不能发生，原因如下：
（1）如果是测定酶活性，表明样品几乎没有酶活性；如果是测定某种物质，则表明该样品几乎不含有此种物质。
（2）体系中还发生了别的反应，该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收，并且变化方向相反，几乎抵消了希望的酶反应，可以通过设置新的对照排除。
（3）样品保存不当。需要仔细检查样品处理、采集和保存以及提取状况。
（4）试剂盒质量问题。可以换一种完全不同的样品来验证，比如去室外随机采取某种正常的叶片来测定。如果同样没有活性，那表明试剂盒质量问题的可能性很大。
14、吸光度特别高怎么办？
（1）现在分光光度计或者酶标仪，允许测定的吸光度范围比较宽。如果吸光度没有超出仪器读数范围，就可以正常测定。
（2）若样品吸光度特别高，超出规定值，应将待测样品进行适当稀释后再进行检测。
（3）紫外波长下用的玻璃比色皿或者普通酶标板，比色皿脏，者比色皿不透光一面对着光源等也会造成吸光度特别高，。
15、测定数据为什么不符合预期？
在测定之前，通常会根据参考文献，或者此前相关测定结果，对本次测定结果有一个预期变化趋势。但是，有时会出现实际测定数据的变化趋势不符合预期的情况。解决方法：1、确保试剂和环境条件合格，严格按照说明书操作；2、同样条件下再重复一次实验，先判断技术重复性，以及计算公式和单位，是否问题；3、如果实验重复结果一致，查找样本有没有问题，样本中是否有干扰物质等；4、如果两者都没有问题，那么就说明测定结果可靠。
16、数据为什么和文献报道差异较大？
文献报道包括公开发布的文献和自己实验室此前的测定数据。通常，生命科学研究的测定数据差异会很大，这与样品本身和测定方法有关。
A.样品本身的影响。同一指标在不同样品，同一样品不同发育阶段或者不同环境下，会发生非常大的变化，尤其是在植物中，或者野生环境下，有些甚至能够达到数量级的程度。
B.测定方法的影响。同一指标不同测定方法的测定结果，有时也会出现非常大的差异。
C.操作和仪器设备的影响。取样代表性、匀浆程度和测定条件等都会有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响。
因此，测定数据与参考文献的比较，必须严格注意样品的遗传背景、培养与处理条件和取样的典型性与代表性等等。另外，还需要注意单位和分母的选择，单位换算要一致。
D.确保参考文献的可靠性。因为样品质量、测定方法和操作水平都可能导致测定结果不一定可靠。尽量参考国家或者行业提供的标准测定数据。
17、为什么同一样品的平行测定结果差异大？
（1）可能是样本中色素造成反应体系不均匀、测定指标提取时离心不完全，杂质影响等原因造成。
（2）系统误差较大，主要与测定仪器的稳定性和操作的精确性有关。在没有出现（1）的情况下，建议进行同一提取液的3次重复测定，看看它们之间的差异，如果差异大，表明系统误差大，必须等待仪器稳定（通常需要开机半小时以上仪器才能够稳定），同时多练习操作，以达到一致。当保证系统误差很小后，再开始正式测定。
18、为什么不同样品测定值差异不显著？
（1）该指标在不同样品间确实无变化。
（2）操作重复性不好，掩盖了组内和组间差异。后者可以看重复之间吸光度变化的重复性，如果重复之间吸光度变化相差很大，表明主要可能是操作不规范造成的，尤其是加液体积不准确和反应时间控制不准确。
19、试剂盒代测，能分批送测吗？
选择试剂盒代测服务时，同一样品不建议分批送测。
原因如下：a因为测定结果受到很多因素的影响，包括样品保存时间与保存状态、仪器设备状态、操作人员、试剂批次和环境条件等等，因此需同一批测定，尽可能减少上述影响因素的影响，保证测定结果的准确性和可比性。
b.分批送测拉长了测定时间，科研进程被耽搁，影响论文发表。
20、试剂盒代测，样品如何寄送？
样品寄送要按照惠诚生物的要求进行包装，需要低温保存的要放足够的冰袋，对于珍贵样品尽可能选择干冰。对于干样或者土壤等样品不需要强调低温。具体样品需提前咨询上海惠诚生物。
