分子POCT的颠覆性变革，这两项技术突然火了！

POC(Point-of-Care)又称即时检测，是IVD行业的一个细分领域，指在采样现场进行的、利用便携式分析仪器及配套试剂快速得到检测结果的一种检测方式。

POCT技术最早始于20世纪中期，由Edmonds以干化学制片测量血糖及尿糖，随后由Ames公司将其检测项目扩大并商业化。由于方法简便快速而得到普遍应用。近20年来，POC检测的发展在全球范围内是肉眼可见的速度在突飞猛进。

中国自2015年POCT第一股上市开始，以每年超过20%的速度快速增长，预计2027年整体市场超过260亿元，远超全球POCT行业7.4%的发展速度，已经是我国IVD行业增长最快的细分领域之一。

来源：前瞻产业研究院

为了更好的理解POC检测，为其技术的发展指明方向，已有几个标准来评估POC检测的适用性。其中包括WHO的ASSURED标准，FDA的CLIA标准，以及在新冠之后提出的STARLITE标准。

来源：https://doi.org/10.3390/ijms232214110

在新冠疫情期间，POCT通过实际场景的应用自证了其技术的成熟性和可靠性，尤其是分子POCT检测技术的广泛运用。

等温扩增(如HCA、MDA、NASBA和LAMP等)在分子POC诊断中发挥了越来越重要的作用。等温扩增具有与qPCR相似的灵敏度和特异性，但是在快速、低成本和便携性方面具有优势，因此成为在资源有限环境下使用POC检测的理想选择。

近几年来，等温扩增技术的进步，尤其是在实时检测、多重扩增和基于芯片的检测方面的发展，提高了等温扩增的灵敏度和准确性，可以说是彻底改变了POC行业，为更快、更方便的诊断铺平了道路。

在多种等温扩增技术中，LAMP是最常用的方法，它可实现在恒定温度（60-65ºC）下对DNA或RNA靶标进行高效、特异和快速扩增。在相同时间内，LAMP扩增 效率比传统 PCR高100倍。不过，LAMP技术也有一些限制，例如具有较高假阳性率，引物设计复杂、重复性不太好。

另一种等温扩增技术，基于核酸序列的扩增（Nucleic acid sequence based amplification，NASBA）也越来越受欢迎，它的核心优势是能在更低的温度下（~41°C）下直接扩增RNA,只需要使用2个特异性引物P1/2，因此在引物设计方面就没那么复杂，更容易优化。

与使用Bst酶链置换活性的LAMP扩增不同，NASBA扩增是依赖AMV逆转录酶、RNase H和噬菌体T7 RNA聚合酶活性进行的反应。

其两个特异性引物与目标RNA序列杂交，并通过逆转录酶生成DNA的互补链（cDNA），然后将其作为模板合成多个RNA副本。新的RNA链和cDNA模板通过变性和再变性分离并重新连接。这一过程在反转录（产生更多的cDNA）、RNA合成和指数级RNA扩增的循环中重复进行，可在90分钟内将目标片段扩增10¹²倍以上。

NASBA反应的反转录过程被直接合并到扩增反应中，因此该技术最适合分析RNA样品。样品中DNA、肝素、柠檬酸盐、血红蛋白、白蛋白和脂质等的污染将不会对结果造成影响，因而适用于可能不适合其他试验检测的样品。且反应温度较低，因此是细菌、病毒等多种病原微生物POC诊断的理想选择。